中药学论文_基于网络药理学、分子对接及实验探

文章目录

1 材料与方法

1.1 茵陈蒿汤的有效成分及靶点的收集与筛选

1.2 疾病靶点获取

1.3茵陈蒿汤和OJ的靶点交集

1.4 交集靶点蛋白相互作用（protein protein inter-action,PPI）网络构建

1.5 GO功能与KEGG通路富集分析

1.6 分子对接验证

1.7 免疫组化实验验证

    1.7.1 药材、试剂

    1.7.2 动物模型制备及分组给药

    1.7.3 免疫组化

    1.7.4 统计学处理

2 结果

2.1 茵陈蒿汤有效成分筛选

2.2 茵陈蒿汤和OJ的靶点交集分析

2.3 交集靶点PPI网络构建

2.4 GO功能与KEGG通路富集分析

2.5 分子对接验证

2.6 茵陈蒿汤对大鼠肝组织中NOS3(eNOS）和NOS2(i NOS）蛋白表达的影响

3 讨论

文章摘要:目的:运用网络药理学探讨茵陈蒿汤调节阻塞性黄疸氧化应激的作用机制,并用分子对接及免疫组化进行验证。方法:首先利用中药系统药理学数据库和分析平台（TCMSP）和UniProt数据库检索并筛选茵陈蒿汤有效成分及作用靶点;通过Gene Cards数据库检索阻塞性黄疸的作用靶点;利用R语言将疾病与药物的有效靶点进行分析,确定交集靶点;通过STRING数据库和Cytoscape软件构建蛋白互作网络;利用R语言进行基因本体论（GO）生物学过程富集分析和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析;利用Autodock_vina软件对内皮型一氧化氮合成酶（eNOS）、诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）和茵陈蒿汤主要化学成分进行分子对接验证;最后通过免疫组织化学方法（IHC）验证茵陈蒿汤对阻塞性黄疸大鼠肝组织中eNOS和iNOS的影响。结果:研究共筛选获得茵陈蒿汤中29个有效成分及177个作用靶点,阻塞性黄疸的2 183个疾病靶点,茵陈蒿汤和阻塞性黄疸的交集靶点123个;经GO和KEGG富集分析得到133个GO生物过程和127个相关信号通路,主要涉及Hepatitis B、流体剪应力与动脉粥样硬化、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）、磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）-蛋白激酶B（Akt）、肝细胞癌、低氧诱导因子（HIF）-1等信号通路;拓扑属性分析发现槲皮素、山奈酚、异鼠李素等主要成分和Akt1、TP53、白细胞介素（IL）6、血管内皮生长因子（VEGF）A、e NOS和i NOS等关键靶点。分子对接验证表明,e NOS和iNOS蛋白与槲皮素、山奈酚、异鼠李素有较好的亲和能力;IHC实验证明与假手术组相比,模型组肝组织中eNOS表达水平降低,而iNOS表达水平升高（P<0.05）;与模型组相比,茵陈蒿汤组肝组织中e NOS表达水平升高,iNOS表达水平降低（P<0.01）。结论:茵陈蒿汤对阻塞性黄疸的作用具有多成分、多靶点、多通路的特点,茵陈蒿汤对阻塞性黄疸氧化应激的调节可能与改变eNOS、iNOS蛋白的表达有关。

文章关键词:

项目基金:《中国药理学与毒理学杂志》 网址: http://www.zgylxydlxzz.cn/qikandaodu/2021/1106/786.html