含精氨酸和抗氧化物质组方的毒理学安全性研究

L-精氨酸是一种非必需碱性氨基酸，主要来源于饮食、蛋白质降解和自身合成，在体内合成速度较慢，具有增强免疫力、保护胃黏膜、促进蛋白合成等生理功能[1-3]，但对于婴幼儿为必需氨基酸，可以起到一定的解毒作用。L-精氨酸增强免疫力的重要作用机制为精氨酸—一氧化氮(nitric oxide, NO)调控模式。L-精氨酸经一氧化氮合成酶(nitric oxide synthase, NOS)催化生成具有生物活性的NO。NO在生物体内承担着重要的生物功能，包括抗炎、降血压、舒张血管等[4-7]。

天然抗氧化物剂含有大量能清除过量自由基的抗氧化成分，如山楂提取物、知母提取物、虾青素等，具有辅助保护心血管、调节免疫、抗氧化、降血糖等功能[8-9]。山楂提取物含有黄酮、原花青素、三萜酸等抗氧化物质，具有保护心血管、抗氧化、抗炎等作用[10]，知母宁具有清热泻火，滋阴润燥，退热消炎，抑菌杀菌，降血糖等功能[11-12]。虾青素属类胡萝卜素，是存在于鱼、虾和藻类中的一种强抗氧化剂，其抗氧化活性高于β-胡萝卜素的10倍、VE的100倍[13]。

该研究重点开展了含L-精氨酸和抗氧化物质(山楂提取物、知母提取物和虾青素)组方的安全性毒理学评价，以期为其临床应用及保健食品研发提供毒理学方面的科学依据。

1 材料与方法

1.1 实验试剂

组方样品由L-精氨酸(L-Arg)、山楂提取物、知母提取物和虾青素为原料，按质量比1∶1∶2∶2制成。敌克松(dexon)，上海晶纯试剂有限公司；2-氨基芴，上海晶纯试剂有限公司；1,8-二羟基蒽醌，Sigma-Aldrich公司；美国胎牛血清，浙江天航科技有限公司；环磷酰胺，Sigma-Aldrich公司；Giemsa染料，salarbio公司；甲醇，天津市康科德技术有限公司；羧甲基纤维素钠，国药集团化学试剂有限公司。

1.2 仪器与设备

BP211D电子天平、BS323S电子天平、BSAS电子天平，德国Sartorius公司；BX51生物显微镜，Olympus公司； BSC-1360ⅡA2生物安全柜，北京中联哈尔仪器有限公司；ADVI2120i血液分析仪，西门子公司。

1.3 动物饲养和处理

SPF级雄性ICR小鼠、SD大鼠,济南朋悦实验动物繁育有限公司,饲养于屏障级动物房，温度20～26 ℃，相对湿度40%～70%，照明时间12 h。设毒理组和对照实验组，分溶剂对照组和样品低、中、高3个剂量组，每组10只动物。

1.4 剂量选择及受试物给予方式

1.4.1 急性毒性试验

L-精氨酸和天然抗氧化剂组方样品,按相当于人体剂量的750倍，即20.0 g/(kg·BW)，连续经口灌胃14 d。记录动物中毒表现和死亡情况，试验结束后进行剖检并记录大体解剖结果。

1.4.2 Ames试验

设8、40、200、1 000和5 000 mg/皿，5个剂量，称取1.25 g样品，加灭菌注射用水至25 mL，混匀，在0.055 MPa条件下灭菌20 min，4 ℃保存，临用时，加灭菌注射用水按1∶4体积比依次稀释成50 000 (不稀释)、10 000、2 000、400、80 mg/mL，试验时，每皿加入各个试剂组样品0.1 mL。

1.4.3 骨髓细胞微核试验

试验设样品组、溶剂对照组和阳性对照组，L-精氨酸和天然抗氧化剂组方样品组按低、中、高3个剂量，分别为2.5、5.0和10.0 g/(kg·BW)，用5 g/L羧甲基纤维素钠(sodium carboxymethyl cellulose，CMC-Na)溶液配制成0.125、0.25和0.5 g/mL混悬液。阳性对照组经灌胃给予2.0 mg/mL的环磷酰胺溶液，总剂量为40.0 mg/(kg·BW)。溶剂对照组给予0.5% CMC-Na溶液。经口灌胃容积均为20 mL/(kg·BW)。

1.4.4 小鼠精子畸形试验

试验设样品组、溶剂对照组和阳性对照组，L-精氨酸和天然抗氧化剂组方样品组按低、中、高3个剂量，分别为2.5、5.0和10.0 g/(kg·BW)，用5 g/L CMC-Na溶液配制成0.125、0.25和0.5 g/mL混悬液。阳性对照组经灌胃给予2.0 mg/mL的环磷酰胺溶液，总剂量为40.0 mg/(kg·BW)。溶剂对照组给予5 g/L CMC-Na溶液。经口灌胃,给予容积均为20 mL/(kg·BW)。连续给予5 d，首次给予后第35天处死小鼠。

1.4.5 大鼠喂养试验

30 d喂养SD大鼠组方样品，以0.67、1.33和2.67 g/(kg·BW)(相当人体推荐量的25、50和100倍) 3个剂量掺入饲料，大鼠摄入饲养量按10 g/(100 g·BW)计，掺入质量分数分别为0.67%、1.33%和2.67%，采用逐级放大法将样品掺入饲料中。空白对照组喂食不添加组方样品的普通饲料。

1.5 实验方法

1.5.1 急性毒性试验

小鼠检疫合格后，取试验小鼠20只，雌雄各半，禁食不禁水16 h后，经灌胃给予质量浓度为0.5 g/mL试验样品20 mL/(kg·BW)，1 d内给予2次，2次间隔时间4 h，每天观察1次，观察14 d，记录动物中毒表现及死亡情况。试验结束后进行剖检并记录大体解剖结果。

文章来源：《中国药理学与毒理学杂志》 网址: http://www.zgylxydlxzz.cn/qikandaodu/2021/0319/543.html